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RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒 分子生物試劑

  • 更新時(shí)間:  2023-07-27
  • 產(chǎn)品型號(hào):  74134
  • 簡(jiǎn)單描述
  • RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒
    RNeasy Plus Mini Kit純化得到的RNA適合對(duì)少量DNA敏感的下游應(yīng)用,如定量real-time RT-PCR。純化得到的RNA還可以用于其他應(yīng)用。
詳細(xì)介紹

RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒

 

原理
細(xì)胞和易裂解組織首先在含有異硫*酸胍的高變性Buffer RLT Plus中裂解和勻質(zhì)化,該緩沖液能使RNases立即失活,以保證分離到完整的RNA。裂解液再流過gDNA Eliminator柱。該離心柱與高鹽緩沖液共同作用,可選擇性高效的去除基因組DNA。加入乙醇以提供RNA結(jié)合的合適條件,樣本再加入到RNeasy Mini離心柱。含有硅膠膜的特制離心柱能特異性的結(jié)合裂解細(xì)胞中的RNA。



RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒

操作流程
可從多達(dá)107個(gè)細(xì)胞或30 mg組織中純化總RNA。簡(jiǎn)潔的工作流程可在25分鐘內(nèi)純化得到已去除基因組DNA的RNA(參見RNeasy Plus procedure )。樣本首先被裂解和勻質(zhì)化。裂解液流過gDNA Eliminator柱,在流過gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,樣本再加上樣到RNeasy Mini離心柱。RNA結(jié)合到膜上,污染物被洗去。獲得高品質(zhì)RNA,洗脫體積30 ?l或更大。
處理不同的起始樣本可用不同的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)方案的不同之處主要在于樣本的裂解和勻質(zhì)化。樣本上樣到gDNA Eliminator柱之后的步驟就類似。此操作流程適合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可從培養(yǎng)細(xì)胞中純化含miRNA等小RNAs的總RNA。
使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)進(jìn)行組織破碎和勻質(zhì)化時(shí),可能會(huì)產(chǎn)生過多泡沫。在破碎和勻漿前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(單獨(dú)提供)可充分減少泡沫產(chǎn)生。Reagent DX經(jīng)仔細(xì)檢測(cè),表明配合此試劑盒使用不會(huì)影響RNA的純度或下游應(yīng)用。


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